Naslov Utjecaj egerolizinskih proteina iz gljiva roda Pleurotus na pčele roda Apis meliffera
Naslov (engleski) Effects of aegerolysin proteins from Pleurotus mushrooms on bees Apis mellifera
Autor Veronika Kukuljan
Mentor Kristina Sepčić (mentor)
Mentor Gordana Glavan (komentor)
Član povjerenstva Željka Maglica (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstva Matej Skočaj (član povjerenstva)
Član povjerenstva Kristina Sepčić (član povjerenstva)
Član povjerenstva Elitza Petkova Markova - Car (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj Sveučilište u Rijeci (Fakultet biotehnologije i razvoja lijekova) Rijeka
Datum i država obrane 2021-09-29, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana BIOTEHNIČKE ZNANOSTI Biotehnologija
Sažetak Egerolizinski proteini ostreolizin A (OlyA), pleurotolizin A2 (PlyA2) i erilizin fosfoetanolamin (CPE), glavni membranski sfingolipid beskralježnjaka. Kada su vezani na CPE, ovi egerolizini regrutiraju partnerski protein pleurotolizin B (PlyB) sa MACPF domenom (eng. membrane-attack complex/perforin), sa kojim formiraju bikomponentne transmembranske komplekse, odnosno transmembranske pore. Kompleksi OlyA6/PlyB, PlyA2/PlyB i EryA/PlyB pokazali su jaki selektivni toksični učinak za važne
štetne insekte kukuruznu zlaticu i krumpirovu zlaticu te stoga predstavljaju nove kandidate u razvoju biopesticida. U ovom istraživanju testirali smo toksičnost kompleksa egerolizin/PlyB za pčelu Apis melifera carnica koja je ekološki i ekonomski važan oprašivač i proizvođač meda. Lipide izolirane iz crijeva pčela razdvojili smo pomoću tankoslojne kromatografije zajedno sa
standardnim lipidom CPE-om te smo ih prenijeli na PVDF membrane i inkubirali sa otopinom OlyA6. Ovim metodama potvrdili smo prisutnost CPEa u staničnim membranama crijeva pčela, kao i vezanje OlyA6 na CPE među lipidima iz crijeva pčela. Metoda površinske rezonancije plazmona i test otpuštanja kalceina pokazali su da su interakcije svih egerolizina sa
liposomima izrađenim od nepolarnih lipida izoliranih iz crijeva pčela značajno jače u prisutnosti PlyB, kao i njihova litička aktivnost. U usporedbi sa OlyA6 i PlyA2, EryA ostvaruje slabije interakcije sa liposomima te posljedično ima manju litičku aktivnost. Na kraju smo istražili utjecaj OlyA6/PlyB, PlyA2/PlyB i EryA/PlyB na hranjenje i preživljavanje pčela. Dok
EryA/PlyB nije utjecao na hranjenje niti preživljavanje pčela, kompleksi OlyA6/PlyB i PlyA2/PlyB imali su toksičan učinak na pčele. Srednja letalna koncentracija (LC50) koja se ispoljava u toku 48 sati iznosi 0,22 mg/mL za OlyA6/PlyB i 0,39 mg/mL za PlyA2/PlyB.
Sažetak (engleski) Aegerolysin proteins ostreolysin A6 (OlyA6), pleurotolysin A2 (PlyA2) and erylysin A (EryA) produced by the mushroom genus Pleurotus bind strongly to CPE, the main sphingolipid in invertebrate cell membranes. Upon binding, these aegerolysins can recruit a protein partner pleurotolysin B (PlyB) that has a membrane-attack complex/perforin (MACPF) domain to form bicomponent transmembrane pore complexes. OlyA6/PlyB, PlyA2/PlyB and EryA/PlyB complexes show selective toxicity toward two important pests: the western corn rootworm and the Colorado potato beetle. Due to their
specific interactions with their membrane lipid receptor CPE, these complexes might represent new candidates for development of biopesticides. In this study, we evaluated the toxicities of these aegerolysin/PlyB complexes to honeybees (Apis mellifera carnica) that are ecologically and economically very important as crop pollinators and honey producers. For this purpose, we separated lipids extracted from honeybee midgut using thin-layer chromatography together with standard lipid CPE. We transferred the separated lipids to PVDF membranes and incubated them with the solution of OlyA6 . These assays confirmed the presence of CPE in honeybee midgut cell membranes as well as binding of OlyA6 to CPE
in honeybee midgut lipids. Surface plasmon resonance and calcein release assay showed that the interactions of all three aegerolysins with the nonpolar liposomes made of honeybee midgut lipids were considerably stronger in presence of PlyB, as well as their lytic activity. Compared to OlyA6 and PlyB, EryA showed weaker interaction with these liposomes and
consequently a lower lytic activity. Lastly, we investigated the effects of OlyA6/PlyB, PlyA2/PlyB and EryA/PlyB on the feeding and survival rates of honey bees. While EryA/PlyB complex did not affect honeybee survival and
feeding rates, OlyA6/PlyB and PlyA2/PlyB were toxic to honeybees with 48 h mean lethal concentrations (LC50) of 0.22 and 0.39 mg/mL, respectively.
Ključne riječi
ceramid fosfoetanolamin
egerolizini
gljive bukovače
kranjska pčela
proteini sa domenom MACPF
testovi toksičnosti
Ključne riječi (engleski)
aegerolysins
carniolian bee
ceramide phosphoethanolamine
oyster mushrooms
proteins with MACPF domain
toxicity tests.
Jezik hrvatski
URN:NBN urn:nbn:hr:193:216423
Studijski program Naziv: Istraživanje i razvoj lijekova Vrsta studija: sveučilišni Stupanj studija: diplomski Akademski / stručni naziv: magistar/magistra istraživanja i razvoja lijekova (mag. pharm. inv.)
Vrsta resursa Tekst
Način izrade datoteke Izvorno digitalna
Prava pristupa Pristup korisnicima matične ustanove
Uvjeti korištenja
Datum i vrijeme pohrane 2021-10-27 09:33:34