prikaz prve stranice dokumenta Effect of disrupting the mRNA turnover on the genome-wide RNA 3'-end structure
  Preuzmi
PDF 1.92 MB
diplomski rad
Effect of disrupting the mRNA turnover on the genome-wide RNA 3'-end structure
2023. urn:nbn:hr:193:703125
Jurković, Borna
Sveučilište u Rijeci
Fakultet biotehnologije i razvoja lijekova

Citirajte ovaj rad

Jurković, B. (2023). Effect of disrupting the mRNA turnover on the genome-wide RNA 3'-end structure (Diplomski rad). Rijeka: Sveučilište u Rijeci. Preuzeto s https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:703125

Jurković, Borna. "Effect of disrupting the mRNA turnover on the genome-wide RNA 3'-end structure." Diplomski rad, Sveučilište u Rijeci, 2023. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:703125

Jurković, Borna. "Effect of disrupting the mRNA turnover on the genome-wide RNA 3'-end structure." Diplomski rad, Sveučilište u Rijeci, 2023. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:703125

Jurković, B. (2023). 'Effect of disrupting the mRNA turnover on the genome-wide RNA 3'-end structure', Diplomski rad, Sveučilište u Rijeci, citirano: 11.12.2024., https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:703125

Jurković B. Effect of disrupting the mRNA turnover on the genome-wide RNA 3'-end structure [Diplomski rad]. Rijeka: Sveučilište u Rijeci; 2023 [pristupljeno 11.12.2024.] Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:703125

B. Jurković, "Effect of disrupting the mRNA turnover on the genome-wide RNA 3'-end structure", Diplomski rad, Sveučilište u Rijeci, Rijeka, 2023. Dostupno na: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:703125

Za citiranje koristite ovu mrežnu adresu: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:703125
Prijavite se u repozitorij kako biste mogli spremiti objekt u svoju listu.
Podaci o radu
NaslovEffect of disrupting the mRNA turnover on the genome-wide RNA 3'-end structure
Naslov (hrvatski)Utjecaj poremećaja u raspadu mRNA na strukturu RNA 3 kraja na razini genoma
AutorBorna Jurković
MentorMichal Malecki (mentor)
MentorChristian Andrew Reynolds (komentor)
Član povjerenstvaMichal Malecki (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstvaChristian Andrew Reynolds (član povjerenstva)
Član povjerenstvaRozi Andretić Waldowski (član povjerenstva)
Član povjerenstvaNela Malatesti (član povjerenstva)
Član povjerenstvaKatarina Kapuralin (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila
akademski / stručni stupanj		Sveučilište u Rijeci
(Fakultet biotehnologije i razvoja lijekova)
Rijeka
Datum i država obrane2023-07-14, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko
područje, polje i grana		BIOTEHNIČKE ZNANOSTI
Biotehnologija
Sažetak
Uridylation is a common widespread 3'-end modification in eukaryotes; however, its impact on mRNA fate is not clear. The mRNA decay mechanism in S. pombe is quite similar to that in humans, where the first step usually involves uridylation of the 3´-end of mRNA by terminal uridyltransferases (TUTases). The aim of this project was to investigate the effects on mRNA decay and mRNA tails when gene expression levels of the factors involved in mRNA decay are manipulated. We decided to delete the enhancer of mRNA decapping gene, edc1, and the exonuclease gene xrn1, while overexpressing the terminal uridyltransferases genes, cid1 and cid16. The transformations were based on the cellular intake of a linear cassette and homologous recombination of the same cassette. The transformed strains were verified using colony-PCR, and overexpression strains were additionally verified using western blotting. Subsequently, mRNA was isolated and purified, and NGS libraries were prepared using a custom GW3´RACE (TAIL-seq) protocol. The samples were then sent for paired-end Illumina sequencing. The sequencing data was analyzed using bioinformatic tools, and included read trimming, filtering and genome alignment. Although the libraries for strains overexpressing cid1 and cid16 did not work, the cid16 expression dependent strain showed a growth defect. Other main findings were as follows: deletion of edc1 or xrn1 resulted in the shortening of mRNA tail length, increased mRNA uridylation, and accumulation of non-tailed mRNAs. In other words, the deletion of edc1 or xrn1 produced the same results, namely the accumulation of mRNA decay intermediaries. Additionally, the differential gene expression analysis revealed six commonly up-regulated genes between the mutants, with the most up-regulated gene being ubi4, which encodes for ubiquitin.
Sažetak (hrvatski)
Uridilacija je česta modifikacija 3'-kraja u eukariotima; međutim, njen utjecaj na sudbinu mRNA nije jasan. Mehanizam raspada mRNA kod S. pombe prilično je sličan onom kod ljudi, gdje prvi korak obično uključuje uridilaciju 3´-kraja mRNA terminalnim uridiltranferazama (TUTazama). Cilj ovog projekta bio je istražiti učinke na raspad mRNA i repove mRNA kada se manipuliraju ekspresije gena faktora uključenih u raspad mRNA. Odlučili smo izbrisati gen edc1, koji je pojačavač dekapiranja mRNA, i gen xrn1, koji kodira egzonukleazu, dok smo prekomjerno izražavali gene terminalnih uridiltranferaza, cid1 i cid16. Transformacije su se temeljile na staničnom unosu linearnog kasetnog elementa i homologne rekombinacije iste kasete. Transformirani sojevi su potvrđeni korištenjem colony-PCR-a, a sojevi s prekomjernim izražavanjem su dodatno potvrđeni korištenjem western blot analize. Nakon toga je mRNA izolirana i pročišćena, a NGS libraries su pripremljene korištenjem prilagođenog GW-3´RACE (TAIL-seq) protokola. Uzorci su zatim poslani na paired-end sekvenciranje Illumina tehnologijom. Podaci sekvenciranja su analizirani korištenjem bioinformatičkih alata, uključujući podrezivanje očitanja, filtriranje i poravnanje s referentnim genomom. Iako biblioteke za sojeve s prekomjernim izražavanjem cid1 i cid16 nisu funkcionirale, soj s prekomjernim izražavanjem cid16 je pokazao defekt rasta. Ostali glavni rezultati su sljedeći: brisanje edc1 ili xrn1 rezultiralo je skraćivanjem duljine repova mRNA, povećanom uridilacijom mRNA i nakupljanjem mRNA bez repova. Drugim riječima, brisanje edc1 ili xrn1 proizvelo je iste rezultate, odnosno nakupljanje intermediarnih produkata mRNA raspada. Također, analiza diferencijalnog izraza gena je otkrila šest zajednički up-reguliranih gena između mutanata, pri čemu je najviše up-regulirani gen bio ubi4, koji kodira ubiquitin.
Ključne riječi
Ključne riječi (hrvatski)
Jezikengleski
URN:NBNurn:nbn:hr:193:703125
Studijski programNaziv: Biotehnologija u medicini
Vrsta studija: sveučilišni
Stupanj studija: diplomski
Akademski / stručni naziv: magistar/magistra biotehnologije u medicini (mag. biotech. in med.)
Vrsta resursaTekst
Način izrade datotekeIzvorno digitalna
Prava pristupaOtvoreni pristup
Uvjeti korištenjaIkona licence Zaštićeno autorskim pravom.
Datum i vrijeme pohrane2023-10-11 12:43:04